?桂花是我國(guó)傳統(tǒng)十大名花之一，被稱為花中月老，它是木樨科木樨屬植物的統(tǒng)稱。木樨屬約30種，分布于亞洲東南部和美洲，我國(guó)分布有25種3變種，代表物種木樨（Osmanthus fragrans (Thunb.) Lour.），即桂花，是我國(guó)著名的香料植物。其花清雅高潔，香飄四溢，享有“香飄十里”的美譽(yù)，是集綠化、美化、香化于一體的優(yōu)良園林觀賞樹種。由于其觀賞價(jià)值高，經(jīng)過長(zhǎng)久的人工栽培選擇和天然雜交，已形成了四個(gè)品種群百余個(gè)品種。盡管桂花的栽培品種數(shù)量龐大，但木樨屬植物的引種保育現(xiàn)狀并不理想。目前，僅有10余種木樨屬植物被引種栽培，大量的種類尚存在保育空缺，甚至有的物種長(zhǎng)期在野外沒有被監(jiān)測(cè)到，其中毛柄木樨就已經(jīng)“消失”了長(zhǎng)達(dá)九十一年之久（圖1）。
圖1：毛柄木樨圖版
毛柄木樨的發(fā)現(xiàn)之史實(shí)
?據(jù)標(biāo)本和文獻(xiàn)資料記載，嶺南大學(xué)曾懷德（W. T. Tsang）先生于1932年在廣東?。↘wangtung）大埔縣（Tapu district）銅鼓山（Tung Koo Shan）首次采集到一種木樨屬植物標(biāo)本，采集編號(hào)：W. T. Tsang 21629，存放在嶺南大學(xué)標(biāo)本館。此后，同號(hào)標(biāo)本先后輾轉(zhuǎn)至中山大學(xué)植物標(biāo)本館（SYS）、華南植物園標(biāo)本館（IBSC）、中國(guó)科學(xué)院植物研究所植物標(biāo)本館（PE）、英國(guó)皇家植物園—邱園標(biāo)本館（K）和紐約植物園標(biāo)本館（NY）等國(guó)內(nèi)外標(biāo)本館（圖2）。1932年，哈佛大學(xué)植物學(xué)家E. D. Merrill初步將其鑒定為木樨（Osmanthus fragrans Lour.）。1956年，賈良智教授認(rèn)為該種可能是新種，擬定名為毛柄木樨（Osmanthus pubipedicellatus Chia）（裸名，未正式發(fā)表）。1958年，P. S. Green在對(duì)NY的木樨屬標(biāo)本進(jìn)行鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)該號(hào)標(biāo)本花部特征和葉柄毛被情況與木樨屬其他物種表現(xiàn)出差異，將其暫定為疑似新種（Osmanthus species ‘C’）并進(jìn)行了描述。1977年，張宏達(dá)教授將館藏在PE的兩份標(biāo)本定名為秀麗桂花（Osmanthus elegans Chang），但也沒有正式發(fā)表。此后，張宏達(dá)教授通過多方查閱文獻(xiàn)和標(biāo)本將其確定為新種，并于1982年，正式以毛柄木樨（Osmanthus pubipedicellatus Chia ex H.T. Chang）的名稱發(fā)表在中山大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版。至此，時(shí)隔50年，毛柄木樨終于有了自己的“戶口”。
圖2：毛柄木樨模式標(biāo)本（W. T. Tsang 21629）
毛柄木樨的“消失”
?然而，自1932年毛柄木樨首次被曾懷德采集，近百年來，再無其蹤跡報(bào)道。我們?cè)谥袊?guó)植物圖像庫（PPBC,https://ppbc.iplant.cn/sp/26412）上查閱到有關(guān)毛柄木樨的圖片記錄均來自武漢植物園，其葉緣具明顯鋸齒（圖3），與毛柄木樨特征并不相符。
圖3：中國(guó)植物圖像庫（PPBC）有關(guān)毛柄木樨的記錄（喬娣攝）
?從中國(guó)數(shù)字植物標(biāo)本館（CVH,https://www.cvh.ac.cn/）、中國(guó)國(guó)家標(biāo)本資源平臺(tái)（NSII,http://www.nsii.org.cn/2017/home.php）以及全球生物多樣性信息機(jī)構(gòu)（GBIF,https://www.gbif.org/）等標(biāo)本網(wǎng)絡(luò)共享平臺(tái)僅查閱到一條除模式標(biāo)本以外的毛柄木樨標(biāo)本記錄，該標(biāo)本由李丙貴和萬紹賓于1975采自湖南江華。該標(biāo)本葉先端漸尖，而非長(zhǎng)漸尖，葉基闊楔形而非狹楔形（圖4），兩者相去甚遠(yuǎn)，也應(yīng)為毛柄木樨的錯(cuò)誤鑒定。因此，歷經(jīng)九十余年，真正的毛柄木樨一直沒有被監(jiān)測(cè)到。
圖4：模式標(biāo)本以外的毛柄木樨標(biāo)本記錄
毛柄木樨的再次發(fā)現(xiàn)
?2022年，華南植物園高級(jí)工程師寧祖林在對(duì)廣東省珍稀瀕危植物遷地保育現(xiàn)狀評(píng)估時(shí)發(fā)現(xiàn)廣東省特有的國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)極危植物毛柄木樨未被廣東省植物園等相關(guān)遷地保護(hù)機(jī)構(gòu)收集保存，進(jìn)而對(duì)其進(jìn)行文獻(xiàn)資料檢索、標(biāo)本查閱、在線數(shù)據(jù)庫檢索和相關(guān)專家咨詢，進(jìn)一步確認(rèn)尚無相關(guān)采集監(jiān)測(cè)記錄。為了尋找這一珍稀瀕危植物。2023年2月，寧祖林帶領(lǐng)華南植物園引種保育團(tuán)隊(duì)前往毛柄木樨模式產(chǎn)地進(jìn)行考察，同時(shí)攜帶模式標(biāo)本彩色打印照片對(duì)周邊村民進(jìn)行走訪調(diào)查以尋找毛柄木樨蹤跡（圖5）。經(jīng)過團(tuán)隊(duì)系統(tǒng)調(diào)查和細(xì)致辨識(shí)，最終尋找到了與模式標(biāo)本葉形極為相似的植株，并相繼在9月份和10月份采集到具花和果實(shí)的標(biāo)本（圖6）。
圖5：野外考察尋找毛柄木樨
圖6：毛柄木樨花和果
毛柄木樨“真身”驗(yàn)證
?為了確認(rèn)我們調(diào)查發(fā)現(xiàn)的木樨屬物種就是1932年曾懷德所采集的毛柄木樨，一方面對(duì)照模式標(biāo)本進(jìn)行形態(tài)特征鑒定，同時(shí)對(duì)模式標(biāo)本采集DNA樣品進(jìn)行分子鑒定。形態(tài)特征鑒定：我們對(duì)毛柄木樨野外種群進(jìn)行了持續(xù)監(jiān)測(cè)，并觀察到葉柄和花梗被毛特征并不穩(wěn)定，存在無毛個(gè)體。通過葉、花、果形態(tài)特征觀測(cè)，發(fā)現(xiàn)有毛個(gè)體和無毛個(gè)體的特征與模式標(biāo)本極為相似，將其鑒定為毛柄木樨（圖7），并補(bǔ)充了毛被、果實(shí)和種子形態(tài)特征描述。毛柄木樨與狹葉木樨形態(tài)特征更為接近，但狹葉木樨花梗無毛，葉片狹橢圓形至披針形，先端長(zhǎng)漸尖，呈長(zhǎng)尾狀，可較好的區(qū)分（圖8）。
圖7：新采集毛柄木樨標(biāo)本與主模式標(biāo)本形態(tài)比較
圖8. 狹葉木樨 Osmanthus attenuates
系統(tǒng)發(fā)育分析：為了進(jìn)一步確認(rèn)我們所采集的個(gè)體即為毛柄木樨，分別從中山大學(xué)標(biāo)本館（SYS）館藏的主模式標(biāo)本、華南植物園標(biāo)本館（SCBG）和邱園標(biāo)本館（K）館藏的等模式標(biāo)本上取了少量葉片進(jìn)行DNA提取。最終，在邱園Molecular Biology and DNA Bank工作人員Imalka Kahandawala和Angela Biro的幫助下，從保存在邱園標(biāo)本館近百年的等模式標(biāo)本（Tsang W.T. 21629,Sept. 8-29,1932）葉片材料提取到DNA樣品（圖9），成功“復(fù)活”了珍稀植物毛柄木樨。結(jié)合我們采集的毛柄木樨疑似個(gè)體DNA樣品，經(jīng)過一系列處理，基于核ITS和葉綠體matK,trnL-trnF,trnS-trnG和trnT-trnL五個(gè)片段構(gòu)建了毛柄木樨及其近緣物種的系統(tǒng)發(fā)育樹，從分子證據(jù)證明了我們所采集的木樨屬植物個(gè)體即為毛柄木樨。有毛個(gè)體和無毛個(gè)體也聚集在一枝，支持形態(tài)特征鑒定結(jié)果（圖10）。至此，“消失”近百年的國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生植物毛柄木樨真身得到確認(rèn)。
圖9：從保存在邱園標(biāo)本館（K）的毛柄木樨等模式標(biāo)本上提取的DNA樣品
圖10：木樨屬及其近緣類群系統(tǒng)發(fā)育樹
拯救保護(hù)行動(dòng)
種群及其生境調(diào)查：為摸清毛柄木樨種群數(shù)量，探究其瀕危原因，我們對(duì)毛柄木樨種群進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測(cè)和群落樣方調(diào)查（圖11），對(duì)其群落特征和種群動(dòng)態(tài)進(jìn)行了分析。調(diào)查發(fā)現(xiàn)毛柄木樨野外種群個(gè)體數(shù)僅11株，初步分析其瀕危原因主要存在以下幾個(gè)方面：（1）毛柄木樨伴生物種豐富，涉及42科67屬103種，群落上層分布較多殼斗科和樟科高大喬木樹種，林下郁閉度高，光照不足；（2）缺乏幼苗和小樹，種群齡級(jí)結(jié)構(gòu)呈單峰型，未來有衰退趨勢(shì)；（3）種群齡級(jí)結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)指數(shù)顯示種群不穩(wěn)定且易受外界環(huán)境干擾；（4）存在生殖問題，花量大但結(jié)實(shí)率低、果實(shí)早落、成熟果實(shí)脫落后被動(dòng)物啃食、種子易于腐爛、林下凋落物過厚且郁閉度高影響種子自然萌發(fā)更新。有關(guān)毛柄木樨的遺傳多樣性及部分瀕危原因有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)。
圖11：毛柄木樨樣方調(diào)查團(tuán)隊(duì)
種苗繁育工作：我們?cè)谝巴獗O(jiān)測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)毛柄木樨開花量大，但結(jié)實(shí)率低，枝條上僅見到零星果實(shí)，也沒有在林下找到幼苗。因此，對(duì)其開展搶救保護(hù)工作勢(shì)在必行，當(dāng)務(wù)之急是解決其繁殖技術(shù)，培育種苗復(fù)壯種群。幸運(yùn)的是，在2023年9月監(jiān)測(cè)到毛柄木樨開花，結(jié)合花和葉片形態(tài)特征初步將其鑒定為毛柄木樨之后，我們便采集了部分枝條帶回植物園進(jìn)行扦插繁殖實(shí)驗(yàn)。在種苗繁育組人員的努力下成功突破其扦插繁殖關(guān)鍵技術(shù)，并對(duì)種群全部個(gè)體進(jìn)行扦插繁殖獲得種苗（圖12），成功將毛柄木樨野外種群基因克隆復(fù)制保存在華南植物園。同時(shí)，我們也在持續(xù)監(jiān)測(cè)毛柄木樨野外種群開花結(jié)實(shí)、果實(shí)發(fā)育及種子萌發(fā)等情況。2024年2月下旬，果實(shí)成熟脫落，掉落在林下地上的果實(shí)有的完全腐爛，有的被動(dòng)物啃食后僅留下了殘殼（圖13）。我們僅收集到4粒完整的種子（圖14），這些種子在播種十多天后均在基質(zhì)中腐爛，未能萌發(fā)出種苗。
圖12：扦插繁殖的小苗
圖13：動(dòng)物啃食后殘留的軀殼
圖14：僅剩的4顆完整的種子
?該研究工作基于1932年采集的毛柄木樨模式標(biāo)本形態(tài)特征和DNA分子證據(jù)證實(shí)了廣東特有國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)極危植物毛柄木樨的再次發(fā)現(xiàn)，并補(bǔ)充了該物種的物候和形態(tài)特征描述，同時(shí)對(duì)其種群和群落特征進(jìn)行了調(diào)查分析，初步揭示了毛柄木樨種群動(dòng)態(tài)和瀕危原因，研究結(jié)果對(duì)珍稀植物毛柄木樨的保護(hù)和資源利用具有重要科學(xué)意義。相關(guān)研究結(jié)果已近日在線發(fā)表于生物多樣性領(lǐng)域?qū)I(yè)期刊Biological Diversity上。華南植物園謝丹工程師為論文第一作者，寧祖林高級(jí)工程師為論文通訊作者，徐一大、劉蓉、董書鵬和邱園Imalka Kahandawala和Angela Biro參與了相關(guān)工作。同時(shí)，該工作得到中國(guó)科學(xué)院昆明植物所張志榮，中山大學(xué)廖文波、羅麗娟和王亞榮，仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院胡秀，華南植物園廖景平、顏海飛、涂鐵要、曾佑派、湯銀珠、許炳強(qiáng)、陳玲、倪靜波、李冬梅、李夢(mèng)靈、李守潔、劉華、鄒璞、張煒、古詩然等老師的幫助，在此一并致謝。該研究得到廣東省重點(diǎn)領(lǐng)域研究計(jì)劃項(xiàng)目和2023年中央林業(yè)草原生態(tài)保護(hù)恢復(fù)資金國(guó)家重點(diǎn)野生動(dòng)植物保護(hù)補(bǔ)助項(xiàng)目的支持。論文鏈接：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/bod2.12018.
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